Metódy pre kvasnice Tri hybridný systém

replikáciu chromozómov , spracovanie messenger RNA , translácia proteínov a kritických rozhodnutí v raných fázach vývoja závisí na interakciu DNA , RNA a bielkovín . Tieto interakcie sú základné biologické procesy génovej expresie a proteosyntézy . Vedci často používajú Saccharomyces cerevisiae , rovnaké druhy kvasiniek používané v pečení a varení , študovať gény , ktoré kódujú špecifické proteíny a analyzovať interakcie medzi proteínmi a iné molekuly . Droždie tri hybridný systém je jedným z troch variantov kvasinkového dvoch - hybridný systém použitý pre štúdium týchto interakcií . Two - Hybrid System

Metóda dvoch hybrid sa používa na detekciu interakcií proteín - proteín tým , že hľadá pre expresiu reporterového génu . Mnohé proteíny majú aspoň dve domény , alebo diskrétne štruktúrne a funkčné jednotky . GAL4 , proteín nájdený v Saccharomyces cerevisiae , má DNA väzbovú doménu ( DBD ) a doménu aktivačný ( AD ) . V tejto metóde , jeden hybridný proteín je kondenzovaný s DBD a druhý k AD . No reportér gén je exprimovaný fúzií iba jeden z hybridov . Vzhľadom k tomu , GAL4 reportér gén je exprimovaný iba vtedy , ak sú prítomné oba kríženci , interakcie proteín - proteín je indikovaný .
Three - hybridný systém

tri hybridný metóda identifikuje reportér gén pre detekciu interakcie proteínu s RNA . Prvý hybridný proteín sa skladá z DBD taveného priamo do RNA väzbové domény . Druhá sa skladá z AD na GAL4 transkripčný faktor súvisiaci s RNA väzbového proteínu . V RNA väzbové domény interagujú s hybridnou molekuly RNA , ktorá sa viaže na dva hybridné proteíny za vzniku komplexu . Tvorba komplexu spúšťa expresiu reporterového génu GAL4 . Vzhľadom k tomu , reportér gén je len zapnutý vytvorenie troch hybridného komplexu , jeho prítomnosť naznačuje interakciu RNA a bielkovín .
One - hybridný systém

Spôsob one - hybrid sa používa na detekciu interakcie proteínu s DNA . One - hybridný systém poistky jeden proteín , ktorý spája AD priamo na DBD . Namiesto toho , aby identifikácia reportéri gén , táto metóda hľadá pre konkrétny proteín , ktorý musí rozpoznať cieľovej sekvencie DNA . Prítomnosť špecifického proteínu označuje interakciu proteínu s DNA .
One - Two hybridný systém

jeden - dva hybridný metóda sa používa k štúdiu proteín - proteín a proteín - DNA interakcie súčasne . Pomocou novo vyvinutých kmeňov kvasiniek , táto metóda využíva GAL4 reportéri gén pre identifikáciu interakcií proteín - proteín a p53 konsenzu pre identifikáciu interakcií proteín - DNA . Táto metóda sa očakáva , že výrazne zvýši presnosť experimentálnych výsledkov tým , že znižuje výskyt falošne pozitívnych výsledkov získaných v iných hybridných systémov .