Ako odstraňovať primer dimér

polymerázovej reťazovej reakcie , PCR alebo , je technika v molekulárnej biológii použité k amplifikácii špecifických oblastí DNA . PCR je závislá na primery , ktoré sú krátke vlákna DNA , ktoré sú komplementárne a špecifické pre DNA záujmu . Kým primery všeobecne bude viazať na DNA zodpovedajúce ich poradie , ale občas bude viazať a rozširujú sa navzájom , čo spôsobuje jav známy ako základné dimer.Things budete potrebovať
sekvencie primeru
Zobraziť ďalšie inštrukcie

1

Skontrolujte obsah GC ( počet G je a C je ) vo vašom sekvencie primeru . GC väzba je silnejšia ako na lepenie , pretože dodatočné vodíkové väzby medzi guanín a cytozín . Optimálne prepojenie je najmenej 50 percent obsahu GC .
2

Skontrolujte teplotu žíhania vašej reakcie . Nízke teploty žíhania , všeobecne definovaná ako 55 ° C alebo nižšej , môže dôjsť k nešpecifickej väzbe na základný náter , ktorý môže spôsobiť primerov diméry navyše k amplifikácii nesprávnych genomových úsekov .
3

Dvojitá -kontrolovať množstvo a koncentrácia primerov , ktoré ste pridali do PCR . Nadbytok primérov , všeobecne viac ako 75 pikomoly , môže spôsobiť primer dimérov , rovnako .