Ako sa pripraviť visiace kvapku

Ak chcete zistiť 3D štruktúry proteínu , musíte sa najprv čistý kryštál nej . Spôsob zavesenia - drop používa kvapku obsahom bielkovín riešenie visiace z sklíčkom . Pod touto visiace kvapka leží nádrž s vyššou koncentráciou soli , ako je pokles . V priebehu doby , vodná para opúšťa pokles a končí v nádrži , čo je proteín ku kryštalizácii . Každý proteín vyžaduje odlišné podmienky ( ako je koncentrácia soli a pH ) a často pokusov a omylov , ponúka jediný spôsob, ako nájsť tú správnu conditions.Things budete potrebovať klipart laboratórny plášť , rukavice a ochranu očí klipart mikropipety s pipetou tipy
1 molárneho roztoku chloridu sodného v 0,05 molárnom octanového pufra , pH 4,7
2 ml Eppendorf skúmavky ( alebo podobný ) klipart odstredivka
24 - jamková doštička
vákuové mazivo v injekčnej striekačke
silikónovaným krycie sklíčko
stlačeného vzduchu
pinzety
Clay ( napríklad modelovacej hmoty alebo podobné )
50 mg /ml lyzozýmu v 0,05 molárnom acetát tlmivého roztoku s pH 4,7
Zobraziť ďalšie inštrukcie

1

Nasaďte laboratórne zariadenia ( kabát , rukavice a ochranné okuliare ) .
2

Pomocou mikropipety pridajte 1,1 ml roztoku chloridu sodného ( soli ) a octanu tlmivého roztoku do trubice Eppendorf .
3

Odstredivka uzavretá skúmavka Eppendorf s roztokom soli vnútri neho asi päť minút pri 13000 otáčkach za minútu . Nezabudnite vyvážiť odstredivku umiestnením ďalšieho mikroskúmavky obsahujúca 1,1 ml vody sa naproti a naproti na soľ roztokom trubice .
4

Pridá sa 1 ml soľného roztoku , aby tak v 24 - i tanier .
5

mazacie striekačky umiestniť tenkú vrstvu mazacieho tuku okolo okraja to dobre . Dbajte na to , pridávať príliš málo , alebo príliš veľa . Ak pridáte príliš veľa tuku , bude tuk bežať dole do studne a prípadne zničiť váš experiment . Ak používate príliš málo , tak nebude vzduchotesný a váš experiment nebude fungovať . Cieľom pre len toľko tuku , že krycie sklíčko a tuk tvorí vzduchotesnosti neskôr .
6

Roll hlinu rukami robiť štyri malé guličky a tlačiť ich do štyroch rohov 24- dobre doska . Budú pôsobiť ako podpera pre zabezpečenie krytu dosky neprichádza do styku s sklíčka .
7

Použiť stlačený vzduch fúkať prach preč sklíčka . Držte sklíčko s párom čistej pinzety .
8

Suck až 4 mikrolitrov roztoku lyzozýmu s mikropipety , a tento roztok do stredu sklíčka . Zmena špičky pipety a pridajte 4 mikrolitrov soľného roztoku . Jemne pipety hore a dole , sanie v kvapaline a potom ju vyhostiť , miešať slaný roztok roztoku lyzozýmu . Dbajte na to , miešať dva bez rozptyľovania kvapaliny celého sklíčka .
9

Otočte sklíčko cez rýchlo , takže sa tekutina nie je skĺznuť , a závod je kolmo na vrchole dobre . Dbajte na to , jemne zatlačte naň tak , že tvoria vzduchotesný uzáver s tukom po celom okrajov dobre .
10

Zatlačte na kryt 24 jamkami na hlinených guličiek , a nechať doska na chladnom mieste .