Ako pestovať parazit v Apicoplast bunky v kultúre

apikoplastu sú typu intracelulárne organely prítomné v jednobunkových parazitov , ktorí spôsobujú závažné ochorenia , ako je malária , toxoplazmózy a kokcidiózy . Organely sú zložité štruktúry vo vnútri bunky , ktoré nemôžu rásť a množiť sami . Vznikli Ak predok parazitov zachvátil ďalšie organizmus , ktorý bol pravdepodobne v súvislosti s červenej riasy . Vzhľadom k tomu , apikoplastu nie sú nezávislé bunky , nemôžu byť pestované v kultúre , samy o sebe . Pre ich rast je potrebné pestovať parazitmi . Čo bude nasledovať , sú inštrukcie ku kultúre červená fáza krviniek Plasmodium falciparum , ktorý spôsobuje malaria.Things budete potrebovať
Parasite sklade
RPMI 1640 kultivačného média
laminárne
autokláve
Albumax II sérum náhradné
D - glukóza
hypoxantín
HEPES
Gentamicínsulfát
kultivačných baniek
Cell inkubátor
Červené krvinky
Zobraziť ďalšie inštrukcie
kultivácia Plasmodium falciparum
1

Nastavte inkubátora na 37 stupňov Celzia a upraviť zloženie plynu na 1 percento kyslíka , 3 percent oxidu uhličitého , a 96 percent dusíka .
2

autokláve všetky non - sterilné vybavenie a materiály
3

Práca v laminárne pre udržanie sterility pripraviť konečné médium pridaním nasledujúceho do RPMI 1640 kultivačného média :

D - glukózy na konečnú koncentráciu 20 mM . celým

hypoxantín na konečnú koncentráciu 0,2 mM . celým

HEPES na konečnú koncentráciu 25 mM . celým

Gentamicínsulfát na konečnú koncentráciu 25 mg /L.

Albumax II na konečnú koncentráciu 0,5 percenta w /v
4

rozdeľovali celkovú čiastku média bolo dosiahnuté v predchádzajúci krok do toľkých kultivačných baniek , ako si želal , a umiestniť ich na trepačke v inkubátore .
5

Po strednej dosiahla 37 stupňov Celzia , pridajte parazita zásob .
6

Zmeňte kultivačného média každý deň , aby parazitmi dobre živený a nažive .
7

Pridať červených krviniek každý druhý deň . Budú napadnutý novými parazitmi , ktoré sú generované v kultúre . Ak sa príliš veľa na banke , rozdeliť jeho obsah do dvoch alebo viacerých ďalších ty .